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Autor: Betreff: Equipment für Hefe-Mikroskopie morpheus_muc Posting Freak Beiträge: 948 Registriert: 20.11.2011 Status: Offline Geschlecht: erstellt am: 10.2.2013 um 10:23   Hallo zusammen! Angefixt durch das Doemens-Seminar, möchte ich mal mit dem Hefe-Mikroskopieren beschäftigen. Ein günstiges Mikroskop hab ich bereits, ebenso eine Thoma-Zählkammer. Bevor ich x-mal bestelle, eine Frage an die Laborexperten hier, was ist so als Grundausstattung für diese Aufgabenstellung nötig, bzw. was nice-to-have? Vielen Dank für die Unterstützung und viele Grüße Michael [Editiert am 20.2.2013 um 22:42 von morpheus_muc] ____________________ Beer ist the answer ...but I can't remember the question scerevisiae Posting Freak Beiträge: 1433 Registriert: 9.11.2012 Status: Offline Geschlecht: erstellt am: 10.2.2013 um 10:36   Zitat von morpheus_muc, am 10.2.2013 um 10:23 Hallo zusammen! Angefixt durch das Doemens-Seminar, möchte ich mal mit dem Hefe-Mikroskopieren beschäftigen. Ein günstiges Mikroskop hab ich bereits, ebenso eine Thoma-Zählkammer. Bevor ich x-mal bestelle, eine Frage an die Laborexperten hier, was ist so als Grundausstattung für diese Aufgabenstellung nötig, bzw. was nice-to-have? Vielen Dank für die Unterstützung und viele Grüße Michael Hast du schon mal in einem Mikrobiologielabor gearbeitet? Welche Laborausstattung hast du zu Hause? Willst du aseptisch arbeiten. Also willst du deine Probe die du dann auszähls, direkt aus dem Kolben den du weiterführst ziehen? Ich nehme an du willst eine Vital-Zellzahl-Bestimmung machen - oder? Wenn du willst kann ich dir Laboranleitungen zur Zellzahlbestimmung schicken. Antwort 1 Biertester Posting Freak Beiträge: 1425 Registriert: 22.1.2012 Status: Offline Geschlecht: erstellt am: 10.2.2013 um 11:00   Zitat: Wenn du willst kann ich dir Laboranleitungen zur Zellzahlbestimmung schicken. Kann ich die auch bekommen bitte? Gruß B. ____________________ Prost! B. Antwort 2 Phalanx Senior Member Beiträge: 311 Registriert: 23.3.2011 Status: Offline Geschlecht: erstellt am: 10.2.2013 um 11:00   @Saccharomyces: Was würdest du zur Vitalfärbung empfehlen? Ich glaube mich zu erinnern, dass wir das im Studium mit einer (gesättigten?) Methylenblau Lösung gemacht haben. (um die toten Zellen blau zu färben) Edit: Typo [Editiert am 10.2.2013 um 11:01 von Phalanx] ____________________ #+- This line is intentionally left blank #+- flickr Antwort 3 scerevisiae Posting Freak Beiträge: 1433 Registriert: 9.11.2012 Status: Offline Geschlecht: erstellt am: 10.2.2013 um 11:03   Zitat von Phalanx, am 10.2.2013 um 11:00 @Saccharomyces: Was würdest du zur Vitalfärbung empfehlen? Ich glaube mich zu erinnern, dass wir das im Studium mit einer (gesättigten?) Methylenblau Lösung gemacht haben. (um die toten Zellen balu zu färben) Für Viabilitätbestimmung mit der Thomakammer nehmen wir Trypanblau. Man darf aber die Probe nicht zu lange stehen lassen. Denn Trypanblau wirkt leicht toxisch auf Hefen und die Anzahl der toten Zellen würde sich sonst erhöhen! Zum Mikroskopieren von morphologischen Merkmalen nehmen wir Methylenblau. [Editiert am 10.2.2013 um 13:32 von scerevisiae] Antwort 4 Phalanx Senior Member Beiträge: 311 Registriert: 23.3.2011 Status: Offline Geschlecht: erstellt am: 10.2.2013 um 11:22   Da Krebserregend ist ist Trypanblau mMn wohl eher nichts für den Hausgebrauch... ____________________ #+- This line is intentionally left blank #+- flickr Antwort 5 scerevisiae Posting Freak Beiträge: 1433 Registriert: 9.11.2012 Status: Offline Geschlecht: erstellt am: 10.2.2013 um 13:31   Zitat von Phalanx, am 10.2.2013 um 11:22 Da Krebserregend ist ist Trypanblau mMn wohl eher nichts für den Hausgebrauch... Das ist richtig. Aber bei Substanzen mit denen man Zell oder Zellsubstanzen färbt gilt generell vorsicht. Die verschiedenen Farbstoffe haften je nach Einsatzzweck an gewisse Zellbestandteile (Membran, DNA, Zellorganellen usw.). Diese Strukturen finden wir auch in unseren Zellen. Für Ungeübte empfiehlt sich daher ohnehin beim Färben das Arbeiten mit Handschuhen. Ich schlage folgende Mindestausrüstung vor wenn man Zellzahlbestimmung mit der Thomakammer betreiben will. Pipetten (1mL und 10mL) Pipettierhilfe physiologische Kochsalzlösung Eprouvetten Eprouvettengestell Pasteurpipetten Schraubverschlussfläschen Färbemittel Objektträger + Deckgläser Thomakammer + Deckglas (meist ein Handschliffdeckglas dass sehr teuer ist und von Mikroskopieranfängern regelmäßig zum Ärger der Laborchefs zerstört wird) Ethanol unverdünnt und unvergällt zum fixieren des Schliffdeckglases auf der Thomakammer Desinfektionsmittel RO-H2O oder destilliertes Wasser aus Kanister Küchenrolle Einweghandschuhe (Zähluhr ist auch praktisch) und eig auch ein Vortexer (ab da gehts eben ins Geld) für aseptisches Arbeiten braucht man dann noch einen Brenner, sterile (Einweg)pipetten und einen Autoklav [Editiert am 10.2.2013 um 15:29 von scerevisiae] Antwort 6 morpheus_muc Posting Freak Beiträge: 948 Registriert: 20.11.2011 Status: Offline Geschlecht: erstellt am: 10.2.2013 um 15:07   Herzlichen Dank scerevisiae! Das ist genau das, was ich mir erhofft hatte, eine klar umrissene Einkaufsliste Irgendwo hab ich aufgeschnappt, dass auch Methylenblau zum Anfärben toter Zellen funktioniert? Dann werd ich mal google unsicher machen auf der suche nach 'nem günstigen Lieferanten... Vielen Dank und viele Grüße Michael P.S. Und ja, die Laboranleitung zur Zählung hätte ich sehr gerne! Vielen Dank schon im Voraus! ____________________ Beer ist the answer ...but I can't remember the question Antwort 7 scerevisiae Posting Freak Beiträge: 1433 Registriert: 9.11.2012 Status: Offline Geschlecht: erstellt am: 10.2.2013 um 15:15   Zitat von morpheus_muc, am 10.2.2013 um 15:07 Herzlichen Dank scerevisiae! Das ist genau das, was ich mir erhofft hatte, eine klar umrissene Einkaufsliste Irgendwo hab ich aufgeschnappt, dass auch Methylenblau zum Anfärben toter Zellen funktioniert? Dann werd ich mal google unsicher machen auf der suche nach 'nem günstigen Lieferanten... Vielen Dank und viele Grüße Michael P.S. Und ja, die Laboranleitung zur Zählung hätte ich sehr gerne! Vielen Dank schon im Voraus! Ja Methylenblau ist auch möglich! Ich würde mir bei einer Bestellung noch Pasteurpipetten und Schraubverschlussfläschen (zum Anlegen von Verdünnungen (zB 1mL Hefesuspension + 9mL NaCl) bestellen. Sowie Linsenreinigungspapier (Was hast du für ein Mikroskop bzw welche Objektive?) Antwort 8 kerosin Senior Member Beiträge: 391 Registriert: 3.8.2007 Status: Offline Geschlecht: erstellt am: 10.2.2013 um 16:45   Falls English kein Problem ist, hat Kai schon mal alles aufgeschrieben: http://braukaiser.com/wiki/index.php?title=Microscope_use_in_ brewing Cheers, Samuel Antwort 9 scerevisiae Posting Freak Beiträge: 1433 Registriert: 9.11.2012 Status: Offline Geschlecht: erstellt am: 10.2.2013 um 17:11   Zitat von kerosin, am 10.2.2013 um 16:45 Falls English kein Problem ist, hat Kai schon mal alles aufgeschrieben: http://braukaiser.com/wiki/index.php?title=Microscope_use_in_ brewing Cheers, Samuel Sieht gut aus Antwort 10 morpheus_muc Posting Freak Beiträge: 948 Registriert: 20.11.2011 Status: Offline Geschlecht: erstellt am: 10.2.2013 um 18:26   Zitat von scerevisiae, am 10.2.2013 um 15:15 Ich würde mir bei einer Bestellung noch Pasteurpipetten und Schraubverschlussfläschen (zum Anlegen von Verdünnungen (zB 1mL Hefesuspension + 9mL NaCl) bestellen. Sowie Linsenreinigungspapier (Was hast du für ein Mikroskop bzw welche Objektive?) Das ist ein guter Tipp, danke. Welches Mikroskop genau muss ich erst zuhause schaun, aber auf jeden Fall keine Ölimmersionsobjektive Vielen Dank und viele Grüße Michael ____________________ Beer ist the answer ...but I can't remember the question Antwort 11 nfaa Posting Freak Beiträge: 576 Registriert: 8.5.2008 Status: Offline Geschlecht: erstellt am: 11.2.2013 um 13:21   @scerevisiae Könntest du diese Anleitung bitte allgemeins zur Verfügung stellen? Gruß, Gerald Antwort 12 morpheus_muc Posting Freak Beiträge: 948 Registriert: 20.11.2011 Status: Offline Geschlecht: erstellt am: 20.2.2013 um 22:41   So, mittlerweile ist alles Material eingetroffen und ich konnte erste, erfolgreiche Mikroskopier-Gehversuche machen. Als Testhefe habe ich das Sediment einer Probe der aktuell laufenden Gärung des dunklen Weißbiers genommen. Zuerst habe ich sie nativ angeschaut, dann 1:10 und 1:100 verdünnt und mit Tryptanblau gefärbt. Trotz des Bresser-Billigmikroskops war alles schön zu sehen, lebende und tote Zellen gut zu differenzieren. Einziger - erwarteter - Wermutstropfen war das beiliegende USB-Okular, das taugt leider gar nichts und die Bilder sind nur "matschig". Vielleicht gibts da mal was besseres, das dann auch mit dem Mac kann... Auf die exakte Auszählung mit der Thomakammer habe ich heute noch verzichtet, das war ja erst Mal zum Üben :-) Das ganze macht auf jeden Fall großen Spaß und kann ich jedem nur empfehlen! Viele Grüße von der MiBio-Front Michael ____________________ Beer ist the answer ...but I can't remember the question Antwort 13 scerevisiae Posting Freak Beiträge: 1433 Registriert: 9.11.2012 Status: Offline Geschlecht: erstellt am: 20.2.2013 um 23:44   Zitat von morpheus_muc, am 20.2.2013 um 22:41 So, mittlerweile ist alles Material eingetroffen und ich konnte erste, erfolgreiche Mikroskopier-Gehversuche machen. Als Testhefe habe ich das Sediment einer Probe der aktuell laufenden Gärung des dunklen Weißbiers genommen. Zuerst habe ich sie nativ angeschaut, dann 1:10 und 1:100 verdünnt und mit Tryptanblau gefärbt. Trotz des Bresser-Billigmikroskops war alles schön zu sehen, lebende und tote Zellen gut zu differenzieren. Einziger - erwarteter - Wermutstropfen war das beiliegende USB-Okular, das taugt leider gar nichts und die Bilder sind nur "matschig". Vielleicht gibts da mal was besseres, das dann auch mit dem Mac kann... Auf die exakte Auszählung mit der Thomakammer habe ich heute noch verzichtet, das war ja erst Mal zum Üben :-) Das ganze macht auf jeden Fall großen Spaß und kann ich jedem nur empfehlen! Viele Grüße von der MiBio-Front Michael Mach mal ein paar Equipmentfotos - würde mich echt interessieren! Antwort 14 morpheus_muc Posting Freak Beiträge: 948 Registriert: 20.11.2011 Status: Offline Geschlecht: erstellt am: 2.3.2013 um 16:53   So, mittlerweile ist soweit alles da und hat auch seinen Platz: Vielen Dank an alle hier für die Tipps! @Labmaster: Danke für den netten Kontakt, Beratung und sehr faire Preise! Pasteurpipetten in unsteril und steril zu haben, war übrigens ne gute Idee! @scerevisiae: Danke für die prima Anleitung! Viele Grüße Michael [Editiert am 2.3.2013 um 18:21 von morpheus_muc] ____________________ Beer ist the answer ...but I can't remember the question Antwort 15 Biertester Posting Freak Beiträge: 1425 Registriert: 22.1.2012 Status: Offline Geschlecht: erstellt am: 2.3.2013 um 19:51   Genau.. alles im Koffer! [Editiert am 2.3.2013 um 19:53 von Biertester] ____________________ Prost! B. Antwort 16 morpheus_muc Posting Freak Beiträge: 948 Registriert: 20.11.2011 Status: Offline Geschlecht: erstellt am: 5.3.2013 um 23:03   So, nun habe ich auch die Thoma-Zählkammer eingeweiht und weiß ich auch, wieso scerevisiae eine Zähluhr praktisch findet Den letzten Starter der 3068 habe ich mal bestimmt und bin auf rund 255 Mrd. Zellen in 650 ml Hefesuspension gekommen. Klingt die Größenordnung einigermaßen plausibel? Viele Grüße Michael ____________________ Beer ist the answer ...but I can't remember the question Antwort 17 Biertester Posting Freak Beiträge: 1425 Registriert: 22.1.2012 Status: Offline Geschlecht: erstellt am: 5.3.2013 um 23:23   Wieviele Zellen durchschnitt in ein Kästchen von 4 ul ? ____________________ Prost! B. Antwort 18 morpheus_muc Posting Freak Beiträge: 948 Registriert: 20.11.2011 Status: Offline Geschlecht: erstellt am: 6.3.2013 um 06:33   Kästchen 4 µl? Bei mir ist aufgedruckt 0,0025 mm2 / 0,1 mm Tiefe, das macht doch 0,00025 mm3 pro Kleinstquadrat, oder? Das wären dann 0,004 mm3 oder µl pro Großquadrat, richtig? Pro Großquadrat waren es um die 30 Zellen, wobei ich es teilweise schwer fand die unterschiedlichen Größen zu beurteilen... Viele Grüße Michael ____________________ Beer ist the answer ...but I can't remember the question Antwort 19 Biertester Posting Freak Beiträge: 1425 Registriert: 22.1.2012 Status: Offline Geschlecht: erstellt am: 6.3.2013 um 06:55   Jetzt noch die Verdünnung ? 1/10 ? ____________________ Prost! B. Antwort 20 morpheus_muc Posting Freak Beiträge: 948 Registriert: 20.11.2011 Status: Offline Geschlecht: erstellt am: 6.3.2013 um 15:38   Sorry, die Verdünnung war 1:50 ____________________ Beer ist the answer ...but I can't remember the question Antwort 21 Biertester Posting Freak Beiträge: 1425 Registriert: 22.1.2012 Status: Offline Geschlecht: erstellt am: 6.3.2013 um 18:11   OK wir zählen 5 Quadranten mitteln das , und dann mal 5 ist 150 pro 20ul mal 50000 ist 7500000 pro ml mal 50 verdünnung ist 375 Milion / ml im Starter mal 650 ml Startermenge = 243,750 Milliarden Zellen 1.0 MILL CELLS/ML/°P . Kommt also auf °Plato und Würzemenge an. http://www.northernbrewer.com/documentation/YeastPitchingRate s.pdf Schaut aber gut aus ( hoffe meine viele Nullen nicht verrechnet ) B. [Editiert am 6.3.2013 um 18:22 von Biertester] ____________________ Prost! B. Antwort 22 BierBauer Administrator Beiträge: 724 Registriert: 8.1.2006 Status: Offline Geschlecht: erstellt am: 6.9.2014 um 14:36   Hallo zusammen, ich hol das hier mal hoch, da ich auch gerne in die (Hefe-)Mikroskopie einsteigen möchte. Leider habe ich davon Null Ahnung. Daher wäre ich für etwas Hilfe dankbar. Die Seite von Kai habe ich schonmal gelesen. Ich hätte gerne ein Mikroskop, was auch anderweitig von meinem Kind verwendet werden kann (natürlich unter Anleitung). Gerne auch Binokular, gebraucht ebenfalls gerne. Bei eBay gibts da einiges, aber was ist gut und passend? @Michael: Was weiter oben ist ja eine Einkaufsliste, was man so alles braucht. Hört sich erstmal viel an, verwendest Du das alles? @Labmaster: Evtl. kannst Du mir was zusammenstellen, wenn das nicht zuviel Aufwand für Dich ist? Herzlichen Dank an Euch vorweg, Stefan Edit: Typos... [Editiert am 6.9.2014 um 14:38 von BierBauer] Antwort 23 BierBauer Administrator Beiträge: 724 Registriert: 8.1.2006 Status: Offline Geschlecht: erstellt am: 11.9.2014 um 05:39   Ich schieb den nochmal hoch... Viele Grüße, Stefan Antwort 24

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